食品源单增李斯特菌喹诺酮类抗生素耐药机制研究

以945株食品源单核细胞增生李斯特菌(Listeria monoocytogens,LM)作为研究对象,分析其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。采用KB法筛选出喹诺酮类耐药的LM,利用PCR检测喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance-determining region,QRDR)的基因突变以及质粒介导喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的分布情况,结合最小抑菌浓度(MIC)值和外排泵抑制剂利血平分析其外排泵的作用,多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)结合血清组对耐药菌株进行遗传多样性分析。结果表明:32株耐药菌株中gyrA、gyrB、parC与parE的QRDR均未发生氨基酸突变,且未检测到PMQR相关基因;而7株fepR基因发现新的氨基酸突变位点,其作用机制有待阐明;外排泵基因lde在耐药LM中皆有检出,78.1%(25/32)LM加入利血平后MIC值降低至原MIC的1/2以下,lde可能是导致LM对喹诺酮耐药的重要因素。血清组分析发现32株耐药菌株分属血清组I.1、I.2、II.1、II.2和III,MLST共分为10种ST型,其中ST87、ST9和ST8为优势株,具有一定的致病能力。结果表明,lde是LM产生喹诺酮耐药的重要因素,但LM潜在喹诺酮耐药分子机制仍有待阐明,同时其潜在的致病性应引起重视。     

单核增多性李氏杆菌多克隆抗体的制备及纯化

采用家兔背部两侧多点皮内基础注射,静脉加强注射,利用饱和硫酸铵(SAS)盐析和G25分析法制备与纯化抗体,制得高纯度、高滴度(1：2560)的多抗,以此作为检测李氏杆菌的诊断试剂。     

ERIC-PCR方法鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌研究

本研究工作共收集食物样品6种62份，从中分离单核细胞增生性李斯特氏菌可疑菌落，用ERIC PCR方法进行鉴定。并用国际生化方法验证，结果表明，两种鉴定方法结论完全一致，证明使用ERIC－PCR技术鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌是可行的，并且耗时短，操作简单。     

单核细胞增多性李氏杆菌生物学特性的初步研究

为了明确单核细胞增多性李氏杆菌的普通生物学特性,对3株单核细胞增多性李氏杆菌标准菌株(L208、L128-9、219/60)进行增菌纯培养、染色镜检、药敏试验及生化试验等;结果表明该三株菌种的培养特性、形态结构、生物学特性基本与已发表的相关资料一致。但药敏实验的结果显示,这三株细菌对多数的抗生素敏感,仅对少数的特殊抗生素表现出耐药性,这与目前菌株耐药性的相关报道相差较大。该研究为以后参照本菌株进行其它相关的深入研究提供了必要的基础。     

植物乳杆菌Y42无细胞培养上清抑制单增李斯特菌生物膜形成研究

为研究植物乳杆菌Y42无细胞培养上清对单核细胞增生李斯特菌(LM)生物膜形成的抑制作用,采用微孔酶标板刃天青显色法确定Y42上清的最小抑菌质量浓度(MIC),微孔酶标板结晶紫染色法检测Y42上清对LM生物膜形成的影响,软琼脂法测定Y42上清对LM爬行运动性的影响。结果显示Y42上清最小抑菌质量浓度为60mg/mL;当Y42上清作用质量浓度为MIC的1/32、1/16、 1/8、 1/4、 1/2时,LM的运动圈直径由81.15mm减小为78.31、 75.35、 69.51、 54.91、33.09mm,对LM生物膜形成的抑制率达到32.90%、 30.81%、 40.75%、 39.93% 、12.15%;普通光学显微镜在10×40倍放大倍数下,观察到Y42上清可显著减少LM在盖玻片上形成生物膜的量。Y42无细胞培养上清可通过抑制LM的运行性来抑制其生物膜的形成。     

绵羊和青贮料中单核细胞增多性李氏杆菌的分离鉴定

本文结合国标方法(GB4789.30-94)对健康绵羊和青贮料进行LM的分离，用常规生化试验和分子生物学方法对分离菌进行互映鉴定。从155只绵羊的鼻腔中分离到7株LM，阳性率为4.5％；从47份青贮料中共分离到5株LM，阳性率为10.64％，且从2份霉变青贮料中检出1株LM，霉变青贮料中LM阳性率高达50％。     

一种有效的单核细胞增生李氏菌检测方法

将两种稀释度（10^-4和10^-7）的单核细胞增生李氏菌液加入鳕鱼增菌液中，加入到鳕鱼增菌液的菌数为55．5个／100ml，按最可能数计数法（MPN）能检测到的菌数为110个／100ml，增菌液DFB培养48h后，能检测到的最低浓度为0．055个／ml，说明所采用的DFB、FB两级增菌，EHA、PALCAM平板分离，再结合一系列的菌株鉴定特征，是一种有效的单核细胞增生李氏菌检测方法。     

李斯特菌检测技术研究进展

在李氏杆菌的6个菌属中,只有李斯特菌和人类的李斯特菌症相关.因此,李斯特菌最有检测意义.本研究介绍了利用血清学、PCR、单克隆抗体和仪器法对李斯特菌的检测方法.并指出,随着分子生物学的快速发展,建立一个快速准确的检测方法成为可能.     

基于ActA基因的单核细胞增多性李斯特菌的序列分型研究

根据单核细胞增多性李斯特菌ActA基因序列保守区设计一对引物，对21个菌株进行PCR扩增，得到长度为820bp的片段。PCR产物经过纯化后直接测序，并对其中的506bp进行同源性分析。结果表明单核细胞增多性李斯特菌分离株具有5个明显不同的克隆谱系，每个谱系的同源性均在95％～100％。16个单核细胞增多性李斯特菌奶相关和环境分离株可被分成4个谱系，其中2个谱系（C、D）均为奶相关分离株和成品奶分离株；加工厂地面污水分离株为独立的一个谱系。初步表明，成品奶中污染的单核细胞增多性李斯特菌来自于奶牛场，而非加工环境。     

单核细胞增多性李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型研究

用限制性内切酶Sma Ⅰ和Apa Ⅰ分别对21株单核细胞增多性李斯特菌菌株基因组DNA进行酶切，用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行遗传多样性分析。结果表明：3株临床分离株（00181、00174和0194）分别存在于亚型A、B、D中；16个单核细胞增多性李斯特菌奶相关和环境分离株主要存在于4个亚型中，其中2个亚型（C、D）均为奶相关分离株（包括原料奶、均质奶（储奶罐）和成品奶分离株），而加工厂地面污水分离株为独立的一个亚型（A）。